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我的闺蜜老红帽
#干细胞#
Lgr5+肠道干细胞（intestinalstemcells，简称ISCs)具有强大的自我更新功能，并且，可以分化为肠道表皮多种高度分化的细胞。肠道干细胞通常栖息在肠道基底皱褶处，并且通过多种因子，比如WNT,R-spondins(RSPO),BMPinhibitors(BMPi)和EGF等来维持其干细胞特性。上述因子同样也可以作为肠道类器官培养的支持和滋养因子。它们来源于多种位置临近的细胞类型，包括上皮细胞和粘膜基底细胞等。在肠道中，临近肠道干细胞的上皮潘氏细胞（PanethCell）以及深层分泌细胞可以通过产生WNT3和EGF来滋养Lgr5+肠道干细胞;当然，各类滋养因子来源可以说是充足且冗余，基质细胞也是它们重要来源之一，其与WNT缺失的类器官共培养也促使类器官增殖。而上皮细胞缺失RSPO和BMPi后，肠道干细胞仍旧基本正常，从而更加凸显基质细胞的重要性。
目前，肠道干细胞研究已经具有多种小鼠模型以及研究策略。当然，上述滋养因子是从何而来和是如何滋养肠道干细胞的，仍旧有诸多未知和争议之处，所用研究技术和策略，仍有不少缺陷。比如，原位杂交以及免疫组织化学等方法可以明确滋养因子的细胞定位，但是，敏感性通常不尽如人意，低表达的基因或者是分泌因子很可能检测不出来。另外，用于上述研究的基因修饰小鼠，比如Pdgfra-Cre,Foxl1-Cre和Gli1-CreERT2等并不能特异性标记产生某中滋养因子的细胞类型，通常是多种细胞类型均可以表达某种滋养因子，这也为研究特定细胞的功能设置了障碍。举例来说，Foxl1+为标志的特络细胞（telocytes）,Gli1+细胞,或者是基底的Pdgfrahighcells均为WNT的主要来源。
年8月4日，来自美国麻省理工学院的merH.Yilmaz研究组在CellStemCell上发表题为Lymphaticsandfibroblastssupportintestinalstemcellsinhomeostasisandinjury的文章，通过构建靶向产生滋养因子细胞的报告基因小鼠，发现RSPO3+GREM1+上皮细胞是RSPO3的主要来源，并且具有维持肠道干细胞的重要作用。
首先，作者构建Rspo3-GFPBAC转基因小鼠，通过免疫荧光检测的方法，确定在小鼠肠道中RSPO主要分布在淋巴管内皮细胞（lymphaticendothelialcells，简称LECs)之中。人类消化道同样有类似的位置分布。而通过RNA-seq技术比较Rspo3GFP和Rspo3GFP+细胞，也确定二者表达差异体现在淋巴管内皮细胞之上。为了进一步研究RSPO3的来源，作者通过单细胞测序的方法，发现淋巴管内皮细胞和RSPO3+GREM1+上皮细胞（简称RGF）是RSPO的主要来源。其中，RGFs同样表达Igf1和Fgf7，这些生长因子已有报道参与类器官增殖。
接下来，作者研究RGFs的具体定位。作者构建Rspo3-GFP;Grem1-tdTomato小鼠，发现在肠道中，RGFs与LYVE+淋巴管内皮细胞比邻而居。这两种分布在干细胞褶皱区域的基质细胞类型，很可能是肠道干细胞滋养因子RSPO3和GREM1的主要来源。
最后，作者研究RGFs和淋巴管内皮细胞对肠道干细胞的滋养情况。作者通过RSPO3+基质细胞和肠道褶皱共培养，确定，CD31+Rspo3GFP+淋巴管内皮细胞和CD31Rspo3GFP+RGF均可以维持肠道类器官的形成和生长。当然，与RGFs的促类器官能力更强。为了进一步在体内确定RGFs和淋巴管内皮细胞的功能，作者构建了这两种细胞条件性敲除Rspo3的小鼠，并确定，无论在上述哪种细胞中缺失RSPO3，其肠道干细胞水平均会明显下降，但并不会影响肠道本身的组织结构。
综上所述，作者发现，肠道干细胞的生长维持依赖于淋巴管内皮细胞和RSPO3+GREM1+上皮细胞。在肠道干细胞皱褶中，这两种细胞比邻而居，并且通过分泌RSPO3来行使功能。
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